【苏丹Ⅳ脂肪染色法的应用及体会】 苏丹四对脂肪染色

  【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2011)07-0260-01   【摘要】脂肪栓塞综合征(fat embolism syndrome,FES)是指创伤或骨折后脂肪栓子进入血流阻塞小血管,尤其是阻塞肺内毛细血管,使其发生一系列的病理改变和临床表现。肺是脂肪栓子最先到达的部位,栓子堵塞肺的小动脉及毛细血管,造成肺的血液灌流障碍。于是,肺的气体交换障碍,导致缺氧。由于脂肪栓子分解出的游离脂肪酸的刺激,肺血浆渗出增加,形成肺水肿,进一步阻碍肺的气体弥散功能,加重低氧血症。
  【关键词】苏丹Ⅳ染色 肪栓栓塞
  
   1 染色过程
  1.1 溶液的配制与方法:(1)试剂配制:苏丹Ⅳ(上海试剂厂)2g,丙酮50ml.,70%乙醇50ml,先将70%乙醇和丙酮混合,再加入苏丹Ⅳ,摇动多次使之尽量溶解至饱和,过滤后用小口砂塞瓶密闭保存备用。(2)防脱玻片:APEC(北京中杉金桥)与丙酮1:30稀释。
  1.2 染色方法:(1)冰冻切片厚8-10um,,防脱玻片贴片,蒸馏水稍洗。(2)Harris苏木素液淡染胞核1min,水洗返蓝。(3)蒸馏水洗后70%乙醇浸洗2秒, 苏丹Ⅳ染液浸染15-20min,70%乙醇迅速分化3秒钟。(4)用滤纸将切片周围的水分吸去,甘油明胶(已加热溶解)封片。
  2 结果
  脂类物质呈橘红色,细胞核呈蓝色。
  3 应用
  2010年9月3日,陈某(女,18岁,泉州泉港人)在一起交通事故致左侧股骨骨折,第二天在医院内死亡。解剖见左肺重500g,右肺重550g,双肺密度增加,表面光滑未见絮状物附着,切面未见明显实变病灶,挤压见较多的粘性液体溢出。HE染色见肺重度呈淤血、水肿,灶性肺气肿,灶性出血,血管腔内可见大小不等边缘光滑的空泡,在空泡周围有中性粒细胞反应(见附照1),高度怀疑系肺脂肪栓子,遂取部分固定后的肺组织经按照本方法进行染色,镜下见肺小动脉、肺泡壁毛细血管内见多量的染成橘红色的脂滴,肺动脉毛细血管内脂滴栓塞,使血管扩张(见附照2)。
  4 讨论
  (1)脂肪组织易溶于酒精,二甲苯等有机溶剂中,不易溶于水,因此选择固定液时应避免使用有机溶剂, 目前推荐使用中性福尔马林。 (2)取轻压时有粘性液体溢出的肺组织进行固定,用吸水纸将组织块的固定液充分吸干,避免冰晶的形成。由于肺组织属于疏松结缔组织,含有大量肺泡,冰冻切片难度大,笔者通过不同的温度多次反复切片得出:进行此类组织切片时使用的shandon冷冻切片机的工作室温度为-45℃,包埋冷冻头温度为-40℃,切出的片子结构比较完整,肺组织血管中的脂肪滴形态良好。(3)防脱玻片粘附切片时,尽量压低玻片与切片的接触面,匀速粘片,可以减少气泡的产生。APEC与丙酮1:30稀释较合适,浓度高时染料易形成背景沉淀,浓度太低易脱片。(4)染色过程中切片一定要保持湿润状态,因切片干燥后脂滴容易收缩,破裂,也可使染色试剂不易渗透,染色不均,影响结果观察。(5)苏木素液染细胞核,染后须在显微镜下观察,太深可用0.5%HCL分化,更要避免苏木素沉淀附着切片中。(6)用作配制苏丹染料的脂溶剂具有挥发性,配好后的染色剂必须使用紧密器皿,需用时吸出少量进行染色,否则染夜中的丙酮挥发很容易发生沉淀。(7)用甘油明胶封片,甘油明胶多滴一些,盖玻片尽量放低轻触甘油明胶使之慢慢溢开覆盖片子,不能用吸水纸吸液或用镊子压迫盖片赶气泡,因为此法会使脂滴移位.如有气泡可用温水浸掉玻片重新封固。
   几乎所有骨折或畸形矫正术的病人都会发生脂肪栓塞,脂肪栓塞通常是无症状的,只有少数病人会发展成脂肪栓塞综合症---多个器官,特别是肺、脑和皮肤的功能紊乱。其发病机制仍然存在争议,但无论如何,FES导致的器官功能失调是组织中脂肪滴进入血流导致的,这个观点是被认可的[3]。尤其是在法医病理学鉴定时对创伤、骨、关节手术后死亡的案例,如果没有明显的死亡原因或是无法解释的脑部或肺部症状时,特别是在尸体解剖时可见到皮肤、心外膜或肺浆膜下出血点,应高度怀疑FES致死的可能性,肺是脂肪栓子最先到达的部位,对肺组织行苏丹Ⅳ染色,找到脂肪栓子是鉴定脂肪栓塞的最可靠的根据。
  参考文献
  [1] Carlson, Dorothy S; Pfadt, Ellen ; Fat embolism syndrome[J];Nursing;April 2011;41(4):72
  [2] 王泊云,病理学技术,北京:人民卫生出版社,2000:208
  [3] Dimitris Georgopoulos;and Demosthenes Bouros; Fat Embolism Syndrome-- Clinical Examination Is Still the Preferable Diagnostic Method; CHEST; April 2003 ; 123(4): 982-983
  作者单位:354000 福建省邵武市立医院病理科
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