[摘要]目的：缺血后处理需要反复夹闭血管蒂,可能对血管造成机械性损伤。药物缺血后处理成为缺血后处理的发展方向。腺苷A2A是调控皮瓣炎症的关键靶点，进行相关研究进一步探究腺苷A2A激活缺血后处理对皮瓣有否保护作用。方法：健康成年新西兰大白兔，分为3组。A组为假手术组；B组为缺血再灌注损伤组；C组，再灌注前5min注射腺苷A2A激活剂。分别进行皮瓣存活率检测和ELISA检测TNF以及IL-6。结果：腺苷A2A激活剂组皮瓣存活率高，炎症因子检测活性低于缺血再灌注损伤组。结论：腺苷A2A激活剂缺血后处理可以抑制炎症因子，具有保护皮瓣作用。运用腺苷A2A受体激活缺血后处理可能成为保护皮瓣的新措施。
[关键词]腺苷A2A；缺血后处理；皮瓣
[中图分类号]R622[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）04-0585-03
Study on the role of the ischemia postconditioning with adenosine A2A receptor agonist
LIN Huang,DONG Yong
(Department of Plastic Surgery,Anzhen Hospital,Capital University of Medical Science,Beijing 100029,China)
Abstract:ObjectiveIschemia postconditioning has been used performed on the vascular pedicle with repeated clamping and loosing which may compromise the vascular.The drug postconditioning is recorded as a future development,widely among heart and kidney and so on.Adenosine A2A is a key target to control the inflammation of the skin flap.So further research is performed to explore whether adenosine A2A postconditioning can protect the skin flap.MethodsThe healthy new Zealand rabbits are divided into 3 groups .A group is defined as sham group;B group is ischemia reperfusion group; C group,adenosine A2A is injected 5 minutes before the reperfusion.. Then the examinations are held about the survival skin flap、TNF and IL-6.ResultsB group has a more survival percentage area of skin flap.The inflammation factor is lower than the ischemia-reperfusion group.ConclusionAdenosine A2A postconditioning can inhibit the inflammation factor and protect the skin flap.It can be a new thearptic measure to protect the skin flap with adenosine A2A postconditioning.
Key words: Adenosine A2A; ischemia postconditioning; skin flap
缺血再灌注损伤的防治一直是众多学者关注的热点,缺血预处理被发现为一种有效的减轻再灌注损伤的手段。在此基础上,有学者提出了缺血后处理概念,并且通过一系列动物实验证实后处理具有心肌，肌肉等保护作用。目前认为腺苷A2A是调控皮瓣炎症的关键靶点，而过度的炎症反应是导致皮瓣缺血再灌注损伤的主要机制之一。我们研究将腺苷A2A激活剂用于后处理皮瓣,观察其是否产生保护效应和对下游炎性细胞因子表达影响。
1实验流程
1.1 实验动物:新西兰大白兔18只, 雌雄不限, 体重2.5～3.0kg。
1.2 动物模型制备及分组：以3%异戊巴比妥钠(1ml/kg)耳缘静脉注射。用随机数字表法将24只大白兔随机分成3组,每组6只。设计左侧腹股沟皮瓣，长宽比为4cm×8cm。沿着设计线切开制备腹股沟皮瓣，同时保留腹壁浅血管备用。
假手术组(A组):只穿线不结扎血管；单纯缺血再灌注损伤组(B组)：缺血4h, 再灌注4h；腺苷A2A受体激活剂后处理组(C组):缺血4h后，腹壁浅静脉缓慢注射腺苷A2A受体激活剂CGS 21680 1 μg,持续5 min, 而后再灌4h。假手术组和缺血再灌注组均于前述注射腺苷A2A激活剂相同时间点向腹壁浅静脉缓慢输注等量生理盐水，5min内滴注完作为对照。
1.3 检测：分别在术前，缺血后4h, 再灌注后4h抽取腹壁浅动脉血检测细胞因子TNF、IL-6。采用ELISA 法, 按说明操作。
1.4 皮瓣成活率分析：手术后7天判断皮瓣成活情况，计算皮瓣成活面积的百分比。
1.5 统计分析：组内比较采用方差分析, 组间采用t检验, P 胞外腺苷聚集是炎症反应初始阶段限制细胞损伤的机体防御性反应，是保护性的自分泌和旁分泌的信号传导机制。腺苷广泛分布于神经系统、心血管系统、消化系统和呼吸系统等组织中，在炎症反应中适度激活抑制性信号传导系统，其重要性在多种炎症疾病中都已被证明[5]。目前已经确定了4种腺苷受体亚型,它们分别是A1、A2a、A2b和A3。其中A2a为高表达受体,在生理状态下,腺苷浓度较低时就可产生作用。腺苷受体均为G蛋白偶联受体,A2a受体主要偶联于Gs蛋白,但在纹状体内则主要偶联于Golf蛋白。腺苷激活A2a受体后通过其偶联的G蛋白使腺苷酸坏化酶活化，促进第二信使cAMP 合成, 产生一系列生物学效应。实验研究发现激动A2a受体抑制中性粒细胞、单核细胞等炎性细胞的聚集和功能，并减少炎性介质的释放（以抑制TNF-α的作用最突出）。Lukashew D等报道通过靶向激动A2a受体能治疗很多炎性疾病，如败血症、创伤、类风湿性关节炎等[6]。
再灌注的早期给予短暂、重复的缺血再灌, 即缺血后处理, 能够减轻再灌注损伤。但是缺血后处理需要反复夹闭血管蒂，可能对血管造成机械性损伤，影响 皮瓣的血运。应用药物缺血后处理组织具有起效快，损伤小的优点，逐渐成为缺血后处理的发展方向。药物缺血后处理成功的关键是针对皮瓣缺血再灌注损伤的机制，寻找有效的治疗靶点。
我们根据临床和前期实验结果，提出了针对缺血再灌注损伤本质上是系列爆发式炎症反应，抑制炎症反应可以缓解缺血再灌注损伤的假说。腺苷A2a受体是机体抗炎的重要受体。目前腺苷A2a受体的抗炎作用已经在心、肝等器官上得到证实[7]。激活腺苷A2a受体可能抑制皮瓣缺血再灌注损伤。本实验探讨应用腺苷A2a激活剂后处理对皮瓣保护的可行性和有效途径。
我们在实验中通过对分组处理的皮瓣进行大体观察,手术后7天皮瓣面积测量,同时对其相关的炎症因子变化进行了研究。结果证实了腺苷A2a受体激活预防皮瓣缺血再灌注损伤和抑制炎症因子释放有关。但是有关A2a受体激活后受体变化以及对炎症的具体调控作用还不明确。在后续的实验中我们将进一步探讨腺苷A2a受体缺血后激活的合适方式和有效途径，除了抗炎症以外，对于细胞凋亡，过量自由基和微循环衰竭等导致再灌注损伤的机制有无影响。
[参考文献]
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[6]Lukashev D,Ohta A,Sitkovsky M.Targeting hypoxia-A2A adenosine receptor -mediated mechanisms of tissue protection[J].Drug Discov Today,2004,9(9):403-409.
[7]陈艳艳,郑荣远.腺苷及腺苷受体在炎症反应中的作用[J].温州医学院学报,2007,37(6):600-602.
[收稿日期]2011-02-26 [修回日期]2011-03-23
编辑/张惠娟