杨树桑黄生物学特性、菌种制作、菌种检验方法

 附 录 A (规范性附录)

 杨树桑黄生物学特性 A.1 子实体 子实体多年生,硬木质,无柄,侧生。菌盖扁半球形、马蹄形或不规则形,腹面凸,长径 3 ~ 21 cm,短径 2 ~ 12 cm,厚 1.5 ~ 10 cm。有黄色翻边,底部亦颜色鲜黄。幼时表面有细绒毛,后脱落,有明显的龟裂,无皮壳,有假皮壳,有同心环棱。盖面呈灰褐色、肝褐色至黑色,有光泽;边缘圆钝,龟裂少,有密生的短绒毛,干后脱落,呈肉桂色至咖啡色。菌肉硬,木质,暗褐色,厚 0.5 cm 左右。菌管多层,层次常不明显,老的菌管有白色菌丝充塞,管口面锈褐色至酱色,管口圆形,每1mm间4~5个。刚毛顶端尖锐,基部膨大,(10 ~ 25)μm ×(5 ~7)μm。

 A.2 菌丝体 菌丝为二体型菌丝系统,具有生殖菌丝和骨架菌丝。气生菌丝多为骨架菌丝,黄色,微螺旋状,直径115 ~ 215μm。基内菌丝多为生殖菌丝,透明,多分支,(115 ~ 215)μm ×(5 ~ 9)μm,部分菌丝多短分支,分支端部膨大呈球形;骨架菌丝很少,壁厚,直径 510 ~ 515μm。

 A.3 孢子 孢子椭圆形,厚壁,黄色,光滑,(3.3 ~ 4.5)μm×(2.4 ~ 3.5)μm。

 附 录 B

  规范性附录)

 杨树桑黄菌种制作 B.1 感官检验 感官要求符合表 5 的规定。

 表 表 5

 菌种感官要求 项 项

 目 观察方法 试管、菌种瓶(袋)、棉塞或硅胶塞、无棉塑料盖、斜面背面外观 肉眼观察 培养基上表面距瓶(袋)口距离、斜面长度、接种量、菌种外观 肉眼观察和测量 杂菌菌落、虫(螨)体 肉眼观察,或用 5× 放大镜观察 子实体原基 随机抽取样本 100 瓶(袋),肉眼观察有无原基,并计算 B.2 微生物学检验 B.2.1 菌丝生长状态及锁状联合 用放大倍数不低于 10 × 40 的光学显微镜对培养物的水浸片进行观察,每一检样观察不少于 50 个视野。

 B.2.2 细菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 GB/T 4789.28 中 4.7 规定的营养琼脂培养基中,28 ℃ 下培养 1 d ~ 2 d,观察斜面表面是否有细菌菌落生长,必要时用显微镜检查。

 B.2.3 霉菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 PDA 培养基中,25 ℃ ~ 28 ℃ 下培养 3 d ~ 4 d,观察是否有菌丝形态菌落或有异味,必要时用水浸片镜检。

 B.3 菌丝生长速度 B.3.1 母种 PDA 培养基,90 mm 直径培养皿,倾倒培养基 30 ~ 35 mL/皿,菌龄 10 d ~ 12 d 的菌种为接种物,用灭菌的 5 mm 直径打孔器在菌落周围相同菌龄处打接种物,接种后置于 25 ℃ ~ 28 ℃ 黑暗培养,并计算长满平板培养皿生长所需天数。

 B.3.2 原种和栽培种 在选定的培养基上接种后置于 25 ℃ ~ 28 ℃ 黑暗培养,并计算长满瓶(袋)所需天数。

 B.4 母种制作 B.4.1 母种培养基配方 配方 1:马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g,水 1000 mL,pH 自然。

 配方 2:马铃薯 200 g、葡萄糖 20g、酵母浸膏 2.0 g、硫酸镁 0.3 g、琼脂 20 g,水1000 mL,pH 自然 配方 3:马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g·L- 1 、磷酸二氢钾 1 g·L - 1 、维生素 B1 10mg,琼脂 20 g,水 1000ml,pH 自然。

 B.4.2 制作方法 试管规格 18 mm×180 mm 或 20 mm×200 mm,无菌接种后在 25 ℃ ~ 28 ℃ 条件培养 10 d ~ 13 d 长满试管斜面,制作过程应符合 NY/T 528 的规定。

 B.5 原种制作 B.5.1 原种培养基配方 配方1:细木屑 10%,玉米粒 60%,黄豆粒30%,pH中性。

 配方2:细木屑 10%,玉米粒 45%,小麦粒 45%,pH中性。

 配方3:细木屑 10%,玉米粒 30%,小麦粒 30%,黄豆粒30%,pH中性。

 B.5.2 制作方法 培养基原料质量应符合 NY 5099 的要求。使用 750 mL 容积透明菌种瓶,或 16.5 cm×38 cm 乙烯袋,在 25 ℃ ~ 28 ℃ 条件培养 40 d ~ 45 d 长满菌种瓶(袋)。

 栽培种制作 B.5.3 栽培种配方 配方1:柞木屑 78%,麦麸 20%,石灰粉1%,石膏粉1%,pH中性。

 配方2:柞木屑 78%,麦麸 15%,玉米粉5%,石灰粉1%,石膏粉1%,pH中性。

 配方3:柞木屑 78%,麦麸 15%,黄豆粉2.5%,玉米粉2.5%,石灰粉1%,石膏粉1%,pH中性。

 B.5.4 制作方法 培养基制作方法同 B.2.2。

 附 录 C (规范性附录)

 杨树桑黄菌种检验方法 C.1 感官检验 感官检验要求符合表 5 的规定。

 表 表 5

 菌种感官要求 项 项

 目 观察方法 试管、菌种瓶(袋)、棉塞或硅胶塞、无棉塑料盖、斜面背面外观 肉眼观察 培养基上表面距瓶(袋)口距离、斜面长度、接种量、菌种外观 肉眼观察和测量 杂菌菌落、虫(螨)体 肉眼观察,或用 5× 放大镜观察 子实体原基 随机抽取样本 100 瓶(袋),肉眼观察有无原基,并计算

 C.2 微生物学检验 C.2.1 菌丝生长状态及锁状联合 用放大倍数不低于 10 × 40 的光学显微镜对培养物的水浸片进行观察,每一检样观察不少于 50 个视野。

 C.2.2 细菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 GB/T 4789.28 中 4.7 规定的营养琼脂培养基中,28 ℃ 下培养 1 d ~ 2 d,观察斜面表面是否有细菌菌落生长,必要时用显微镜检查。

 C.2.3 霉菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 PDA 培养基中,25 ℃ ~ 28 ℃ 下培养 3 d ~ 4 d,观察是否有菌丝形态菌落或有异味,必要时用水浸片镜检。

 C.3 菌丝生长速度 C.3.1 母种 PDA 培养基,90 mm 直径培养皿,倾倒培养基 30 ~ 35 mL/皿,菌龄 10 d ~ 12 d 的菌种为接种物,用灭菌的 5 mm 直径打孔器在菌落周围相同菌龄处打接种物,接种后置于 25 ℃ ~ 28 ℃ 黑暗培养,并计算长满平板培养皿生长所需天数。

 C.3.2 原种和栽培种 在选定的培养基上接种后置于 25 ℃ ~ 28 ℃ 黑暗培养,并计算长满瓶(袋)所需天数。

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