【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)09－0010－02 【摘要】弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)生发中心组（GCB）和非生发中心组(non-GCB)的Ki-67、Bcl-2蛋白表达之间可能存在相关性，且这二者都被认为与细胞周期及增殖调控有关，提示二者在肿瘤的发展过程中可能有协同作用。�
【关键词】淋巴瘤；免疫组化；组织微阵列
DLBCL是非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)中最为常见的组织学类型,在欧美和日本占成人NHL的30%～40%［1］。DLBCL的形态学、免疫表型、遗传学和临床表现极具异质性。�
1 材料和方法�
1.1材料 选取彭泽县人民医院病理科DLBCL存档蜡块53例，经2位副主任医师重新阅片，明确诊断并排除可能由惰性淋巴瘤转化为DLBCL的病例。存档蜡块全部重新制作HE切片，参照2008年WHO关于淋巴造血组织肿瘤分类标准，由两位副主任医师对其组织学和免疫表型进行回顾性分析并确诊。另选淋巴结反应性增生标本20例做对照组。�
1.2 方法�
1.2.1 DLBCL组织芯片的构建与制备: 1.组织芯片模块制做：将熔化石蜡(加入等量的蜂蜡)制作成2.5×2×0.5大小的空白蜡块，设计制作受体蜡块。2、组织芯片的设计和制备：将原蜡块放在45℃温箱中烘5-10min待蜡块变软，然后，先在显微镜下定位，避开出血坏死区，选取肿瘤组织丰富的区域，用穿刺针从组织块选定部位逐个取出组织芯，放入预先设计的阵列模块中，制成组织芯片。将制成的组织芯片面朝下放在铜板上，于55℃放置30min，轻压模块使组织柱在模块中排平。待冷却后放入72℃烤箱中，维持时间1小时，目的是使组织芯与受体蜡块充分融合。3、组织芯片蜡块采用连续切片，切片厚度约4μm，用多聚赖氨酸处理过的玻片捞片，置37℃电热恒温箱中烤片过夜，以备实验用。�
1.2.2 免疫组化结果判定： CD20、CD79a、CD3、 CD10、Bcl-6、MUM-l用来帮助判断肿瘤细胞及明确诊断并进行GCB和non-GCB分组；CD20、CD79a、CD3、CD10、Bcl-2着色部位位于细胞膜，如果有大于30％以上的细胞出现阳性着色记为阳性；Bcl-6、MUMl为胞核着色，如果有大于30％以上的细胞出现阳性着色记为阳性；Ki-67着色部位位于胞核，如果有大于50％以上的细胞出现阳性着色，确定为该蛋白阳性。�
1.3 统计处理: 免疫组化结果采用百分率比较采用X2检验,当样本例数较少时，采用Fisher确切概率检验；蛋白表达的相关性采用Spearman相关检验，采用SPSS13.0软件进行统计学处理，以P［2］报道GCB和non-GCB表达分别为37%(21/57 ) 和63%(36/57例)。Peh［2］报道GCB和non-GCB表达分别为39.3%（33/84）和60.7%（51/84）。GCB组发病比率比本组试验的比例高。但本组试验的分组情况与国内报道的相似，如徐方平报道GCB比例为24.5%，李义报道GCB比例为21.9%，提示国内的DLBCL大多起源于生发中心后细胞，可能提示预后更差。�
Ki-67在细胞周期的G、S、G2和M期中表达，Ki-67阳性细胞比率反映了进入细胞周期的增生细胞比率，是比较理想的检测细胞增殖活性的抗体。Ki-67高表达表示处于增殖周期的细胞比例大，由于增殖比例高，倍增时间短，往往肿瘤负荷较大，预后一般较差。有很多试验提示Ki-67高表达与预后差有关。如Jovanovi?报道，Ki-67高增殖（＞60%）患者有差的总生存率。�
本试验中，Ki-67在GCB和non-GCB组中表达率分别为58.3%（7/12）和12.2%（5/41），差异有统计学意义（P=0.036）。Ki-67在GCB组表达率高，试验提示Ki-67高表达与预后差有关，但GCB组预后好，这些结论似乎与已有的结果相矛盾。但也有相似的试验结果支持此结果，如Hasselblom报道，低Ki-67表达有差的预后。Jerkeman报道，相对于中度和高度表达Ki-67，低Ki-67表达与差的EFS有关，低Ki-67表达曲线提示有复发的危险。Wilson报道，Ki-67与预后的关系是复杂的，高的和低的表达率与差的预后有关。高表达率患者预后差，可能与肿瘤的再增殖及继发突变有关。低表达患者预后差可能与大部分肿瘤细胞处于G0期，化疗抵抗有关，这也被别的试验所证实。�
在本试验中，在15例Bcl-6阳性表达的患者，Ki-67有8例表达，两者之间呈正相关（r=0.461）。Bcl-6、Ki-67两者都被认为与细胞周期及增殖调控有关，这两者正相关提示它们可能在肿瘤的发生发展过程中可能互相促进，但其作用机制及其对预后的影响作用，期待以后的继续研究。�
Bcl-2蛋白是一种凋亡抑制因子，通过调节线粒体、控制细胞色素C和其他一些凋亡因子释放，增加抗包括放射线、化疗药物在内的促进凋亡因素的能力，对抑制凋亡起重要作用。有关Bcl-2蛋白高表达与DLBCL患者预后的关系尚有争议。普遍认为，有关Bcl-2蛋白高表达与DLBCL患者预后差有关。如Soukup报道，Bcl-2高增殖与高的死亡率相关。Muris]报道，Bcl-2的表达与差的预后有关，是最强的预后提示因子。但是，有几个研究表明，随着利妥昔的应用，Bcl-2的预后提示作用被抵消［1］。�
在本试验中，Bcl-2在GCB和non-GCB表达分别为58.3%（7/12）和53.7%（22/41），两组表达无差异。 Yuko［2］报道Bcl-2蛋白在GCB和non-GCB表达分别为71%（15/21）和67%（24/36），两组表达无差异。与本试验的研究结果相比，蛋白表达率比本试验的稍偏高，但两组表达无差异与本试验结果一致。
参考文献�
［1］ Hirose Y, Masaki Y, Karasawa H,et al. Incidence of diffuse large B-cell lymphoma of germinal center B-cell origin in whole diffuse large B-cell lymphoma: tissue fluorescence in situ hybridization using t(14;18) compared with immunohistochemistry［J］. Int J Hematol. ,2005, 81(1):48-57.�
［2］ Peh SC, Gan GG, Lee LK,.et al .Clinical relevance of CD10, BCL-6 and multiple myeloma-1 expression in diffuse large B-cell lymphomas in Malaysia［J］.Pathol Int, 2008, 58(9):572-579.01(11):4279-4284.�
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作者单位：332700 江西彭泽县人民医院病理科