[摘要]目的:研究杜仲不同提取部位抗UVA致HaCaT细胞光老化的作用,并初步探讨其作用机制。方法:杜仲乙醇提取物经大孔树脂制备不同浓度乙醇梯度洗脱部位,分别作用于HaCaT细胞光老化模型,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法测定细胞活性,测定细胞培养液中LDH、MDA、SOD活力,确定并筛选杜仲抗皮肤光老化的作用及有效部位。结果:与模型组相比,浓度为1255μg/ml的50%乙醇大孔树脂洗脱部位能提高细胞活性(P 1.6指标观测
1.6.1细胞形态:用倒置显微镜观察各组细胞的形态变化。
1.6.2细胞活性:向每孔(含100μl培养液)加入20μl浓度为5μg/ml的MTT,孵育4h,弃上清,加入150μl DMSO,置恒温培养振荡器内振荡10min,酶标仪测定各孔在492nm处吸光值(OD值)。按公式2计算细胞活性。
细胞活性=OD实验组/OD对照组×100%……公式2
1.6.3 LDH、SOD、MDA测定:按LDH、SOD、MDA测定试剂盒说明进行检测。
1.7统计处理:由SPSS 13.0软件完成数据分析。
2结果
2.1 对细胞形态的影响:倒置显微镜可观察到空白对照组细胞形态一致,边界清楚,排列紧密。模型组细胞数减少,细胞贴壁性降低,细胞间隙增大,细胞变圆或不规则,细胞体积变小,部分细胞裂解成细胞碎片,并有大量漂浮细胞。与模型组相比,125μg/ml的50%乙醇大孔树脂洗脱部位给药组细胞形态未发生明显改变。见图1。
2.2 对细胞活性的影响:结果见表1,与空白对照组相比,模型组细胞活性显著降低,二者具有显著性差异(P